El
calor es el método de elección para esterilizar el material de laboratorio
resistente a las altas temperaturas. La temperatura y el tiempo requeridos para esterilizar un material
dependen de que se esté utilizando calor seco o calor húmedo.
Todo
el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse
mediante:
Horno,
durante 2 horas a 170-175°C o autoclave, durante 15 min como mínimo a 121°;C
Material:
Matraces
erlenmeyer (250, 500 y 1000 mL)
Pipetas (1 y 10
mL)
Probeta de 100 mL
Espátula y
agitador de vidrio
Mechero, tripie y
tela de asbesto
Tubos de esnaye (
de 16X150mm y 22X175mm)
Cajas de preti de
vidrio o plastico
Vaso de
precipitado de 250 mL
Gradilla y mosca
Algodón y papel de
envoltura
Equipo:
Autoclave
Balanza
semi-analítica
Parrilla de
calentamiento y vibración
REALIZAR EL LAVADO
DEL MATERIAL A ESTERILIZAR
1. Lavar el
material de vidrio (pipetas, tubos y matraces) utilizando el escobillón
apropiado y detergente aniónico.
2. Lavar las cajas
de petri, material plano e instrumental con una fibra suave (esponja) y
detergente aniónico
3. Enjuagar con
abundante agua los materiales lavados en los pasos 1 y 2
4. Enjuagar con
agua destilada, escurrir y secar en el horno a temperatura ambiente
PREPARACIÓN DEL
MATERIAL PARA ESTERILIZAR POR CALOR HÚMEDO
Tubos de ensaye
1. Tapar dos tubos
de ensaye de 16x150 mm con tapones de algodón siguiendo las instrucciones del
profesor.
2. Colocar los
tubos en un bote de lámina, taparlos con gorros de papel kraft y asegurarlos
con una liga.
3. Colocar sobre
los tubos un trozo de cinta indicadora.
4. Anotar en una
etiqueta fecha, equipo, grupo, medida de los tubos y cantidad preparada y
sujetarla a los tubos preparados.
Cajas de petri
1. Envolver 8
cajas de petri con papel kraft siguiendo las indicaciones del profesor.
2. Etiquetar sobre
el papel escribiendo los siguientes datos: fecha, equipo, grupo y cantidad de
cajas envueltas.
3. Colocar sobre
el papel un trozo de cinta indicadora
Pipetas
1. Colocar en la
boquilla de cada una de las pipetas un tapón de algodón utilizando una aguja de
disección o un clip metálico, cuidando que no quede muy compactado.
2. Flamear (solo
si es necesario) en la flama del mechero las boquillas de las pipetas a fin de
eliminar el exceso de algodón.
3. Envolver de
manera individual cada una de las pipetas con una tira de papel kraft iniciando
en la punta y fijar el extremo del papel (boquilla) con cinta indicadora y
anotar la capacidad.
4. Escribir sobre
el papel la fecho, equipo y grupo.
Matraces
1. Colocar en la
boca de cada matraz un tapón de algodón siguiendo las instrucciones del
profesor.
2. Elaborar un
gorro de papel kraft ligeramente más grande que el tapón de algodón.
3. Colocar sobre
los matraces un trozo de cinta indicadora.
4. Etiquetar los
matraces escribiendo fecha, equipo y grupo.
Material
instrumental
1. Envolver con
papel kraft la tijera y la pinza
2. Dibujar con
lápiz una flecha que indique la punta.
3. Anotar sobre el
papel la pieza de que se trate, fecha, equipo y grupo.
Portamembranas y
membranas
1. Abrir el
portamembranas y revisar que contenga el empaque.
2.- Colocar con
ayuda de una pinza la membrana.
3. Cerrar el
portamembranas.
4. Envolver en
papel kraft.
PREPARACIÓN DEL
MATERIAL PARA ESTERILIZAR POR CALOR SECO
Tubos de ensaye
1. Colocar en dos
tubos de ensaye una cubierta de papel aluminio.
2. Colocarlos en
una gradilla metálica.
3. Hacer una
etiqueta con la fecha, equipo y grupo y sujetarla a la gradilla.
4. Colocar en los
tubos un trozo de cinta indicadora
Cajas de petri
1. Colocar en un
cilindro metálico para cajas petri dos cajas en posición invertida (NOTA: Este
método no se debe utilizar para esterilizar material contaminado)
2. Colocar una
etiqueta sobre el cilindro con la fecha, el no. De cajas que contiene el
cilindro, equipo y grupo.
3. Colocar sobre
el cilindro un trozo de cinta indicadora.
Pipetas
1. Colocar en la
boquilla de cada una de las pipetas un tapón de algodón con ayuda de una aguja
de disección o un clip metálico.
2. Flamear las
boquillas (solo si es necesario) en la flama del mechero a fin de eliminar el
exceso de algodón.
3. Colocar en el
interior del cilindro pipetero un poco de papel aluminio
para evitar que la punta de las pipetas se rompa.
4. Colocar las
pipetas en el interior del cilindro pipetero.
5. Colocar sobre
el cilindro pipetero una etiqueta con la capacidad de las pipetas, fecha,
equipo y grupo.
6. Colocar sobre
el cilindro pipetero un trozo de cinta indicadora.
Matraces
1. Colocar en la
boca de un matraz de 125mL una tapa de papel aluminio.
2. Etiquetarlos
con la fecha, equipo y grupo.
Pinzas y tijeras
1. Envolver con
papel aluminio por separado una pinza y una tijera.
2. Etiquetarlas
con fecha, equipo y grupo.
Esterilización por
calor húmedo
Algunas
consideraciones que se deben tener en cuenta cuando se esteriliza con calor
húmedo son las siguientes:
· Tener
cuidado de eliminar todo el aire del autoclave
· Colocar
agua suficiente hasta el nivel de la rejilla o en la marca del autoclave
vertical
· Cuando
se caliente el autoclave observar que no salga vapor por la tapa, en caso de
suceder revisar el empaque
· Si
se está utilizando autoclave vertical
1. Preparar un
tubo de ensaye de 13x100mm con 3mL de caldo nutritivo estéril y etiquetarlo
2. Colocar en el
tubo una tira de esporas de Geobacillus stearothermophilus, tapar
el tubo con tapón de algodón y esterizarlo en autoclave a 121°C y 15 lb/pul de
presión durante minutos. En este punto colocar el material preparado para esterilizar por calor
húmedo.
3. Los tubos de la
sección 4.1 puntos 2 y 4 son los testigos positivo y negativo respectivamente.
4. Incubar el tubo
a 55°C durante cinco días a baño maría y observar diariamente.
5. Anotar en
la bitácora de laboratorio cualquier cambio en cuanto a la aparición
de turbidez.
Esterilización
por calor seco
1. Precalentar el
horno a 170°C.
2. En un tubo de
ensaye de 16x150 mm sin esterilizar y vació colocar una tira de papel filtro
que contenga esporas de Bacillus subtilis y cubrir la boca del
tubo con papel aluminio.
3. Colocar el
material preparado para esterilizar y el tubo del punto 2 en el horno
precalentado a 170°C esperar que la temperatura se ajuste nuevamente
a 170°C, en ese momento empezar a medir el tiempo de 1h.
4. Los tubos de la
sección 4.1 puntos 2 y 4 son los testigos positivo y negativo respectivamente.
5. Después de
transcurrido el tiempo de esterilización, apagar el horno y esperar a que el
termómetro indique la temperatura ambiente. Abrir el horno retirar el material
y el tubo de ensaye con la tira de esporas.
6. Con ayuda de
una pinza estéril y bajo condiciones asépticas colocar la tira de papel filtro
conteniendo las esporas de Bacillus subtilis a un tubo de
ensaye de 16x150 mm que contenga 3 mL de caldo nutritivo estéril y etiquetarlo.
7. Incubar a 55°C durante 24-48 h. Observar diario
y anotar en la bitácora de laboratorio cualquier cambio en cuanto a la
aparición de turbidez
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